情緒和認知是上等神經(jīng)精神活動的重要內(nèi)容，其功能研究是腦科學研究的重要部分。免yi系統(tǒng)參與調(diào)節(jié)中qu神經(jīng)系統(tǒng)的思維活動，其機制錯綜復雜，其中亦包括免yi細胞以及免yi分子如細胞因子等對中qu神經(jīng)系統(tǒng)功能的調(diào)節(jié)作用。并且，神經(jīng)精神ji病與免yi系統(tǒng)炎癥密切相關(guān)，可表現(xiàn)為臨床上常見的中qu神經(jīng)系統(tǒng)ji病與免yi系統(tǒng)的“共病”現(xiàn)象，包括慢性炎癥與抑郁癥“共病”，艾滋病與癡呆癥“共病”的現(xiàn)象等。其中免yi系統(tǒng)的細胞因子以及趨化因子是導致該“共病”現(xiàn)象的重要活性分子，發(fā)揮對認知功能相關(guān)ji病如阿爾茨海默病，以及情緒障礙相關(guān)ji病如焦慮癥、抑郁癥等ji病的重要調(diào)節(jié)作用。  

聯(lián)體結(jié)合模型（Parabiosis)通過血管吻合術(shù)將兩只小鼠腹部縫合在一起，使兩只小鼠共用一套血液循環(huán)系統(tǒng)。近年來，該模型被廣泛應用于衰老領(lǐng)域的研究，是研究免yi分子對中qu神經(jīng)系統(tǒng)功能影響的重要模型。2011年斯坦福大學TonyWyss-Coray教授課題組為研究免yi微環(huán)境對機體衰老的影響，采用聯(lián)體結(jié)合模型，篩選出6個系統(tǒng)因子（Systemicfactor)在這一過程中發(fā)揮重要作用，包括CCL2(MCP-1)、CCLll(Eotaxin)、CCL12(MCP-5)、CCL19(MIP-3p)、p2M(p2microglobulin)、觸珠蛋白（Haptoglobin)。這六個系統(tǒng)因子中，CCL2及CCL12對中qu神經(jīng)系統(tǒng)的功能的調(diào)節(jié)作用己有較多報道，CCL2水平升高與認知功能損傷程度呈正相關(guān)，CCL12與低氧誘導的神經(jīng)炎癥關(guān)系密切。該團隊隨后研究表明，CCL11、p2M可抑制小鼠海馬區(qū)的神經(jīng)發(fā)生，導致小鼠學習記憶能力下降；側(cè)腦室注射CCL11中和抗體可顯著改善CCL11對小鼠海馬區(qū)神經(jīng)發(fā)生的抑制作用，恢復小鼠空間學習記憶能力，而敲除P2M基因亦可改善上述損傷。  

趨化因子CCL19是在聯(lián)體結(jié)合模型基礎(chǔ)上篩選出的6個系統(tǒng)因子之一。它屬于趨化因子CC家族，其受體為CCR7。在免yi系統(tǒng)中，CCL19主要由中性粒細胞、巨噬細胞等分泌，其受體主要表達在T淋ba細胞、B淋ba細胞、DC細胞表面。CCL19通過與CCR7受體結(jié)合趨化T淋ba細胞、B淋ba細胞、DC細胞迀移至病灶區(qū)域發(fā)揮作用。此外，CCL19/CCR7軸亦對T淋ba細胞的歸巢及存活發(fā)揮重要作用。近年來研究表明，大腦的星形膠質(zhì)細胞以及腦血管內(nèi)皮細胞皆可分泌趨化因子CCL19，在中qu神經(jīng)系統(tǒng)炎癥時，趨化免yi細胞進入中qu神經(jīng)系統(tǒng)，到達病灶區(qū)域。中qu神經(jīng)系統(tǒng)炎癥反應亦伴隨著血漿中CCL19表達水平的異常，例如多發(fā)性硬化癥、腦缺血性損傷、神經(jīng)炎癥ji病的患者，其血液和腦脊液中趨化因子CCL19的表達水平皆異常升高。CCL19受體CCR7可表達于海馬、胼胝體區(qū)域的星形膠質(zhì)細胞，然而其對星形膠質(zhì)細胞功能的影響尚不清楚。CCR7基因敲除的小鼠表現(xiàn)為學習記憶能力的損傷，以及抑郁及焦慮樣情緒障礙。以上研究提示趨化因子CCL19/CCR7對中qu神經(jīng)系統(tǒng)的作用不可忽視。情緒和認知是*為重要的兩類腦上等神經(jīng)精神功能，但是，目前報道趨化因子CCL19對情緒以及認知功能的影響尚不明確。  

本課題以正常小鼠以及長期不可預期性慢性應激模型小鼠為研究對象，研究趨化因子CCL19對小鼠認知樣行為以及情緒樣行為的影響。并從免yi系統(tǒng)功能和神經(jīng)系統(tǒng)功能兩個方面，研究趨化因子CCL19對認知或情緒樣行為影響的機制。  

**部分趨化因子CCL19對正常小鼠認知及情緒樣行為的影響1.趨化因子CCL19對正常小鼠認知樣行為的影響  

選取2-3月齡C57BL/6小鼠，分別側(cè)腦室單次注射CCL19(0.05jig)以及隔天腹腔注射CCL19(10pg/kg)，注射共12次歷時35天。通過六臂  

水迷宮實驗，觀察CCL19對小鼠空間學習記憶能力的影響；通過新物體識別實驗，觀察CCL19對小鼠物體識別記憶能力的影響。結(jié)果表明，趨化因子CCL19單次側(cè)腦室注射和腹腔注射12次，均對小鼠在六臂水迷宮實驗中的錯誤數(shù)，新物體識別實驗中物體辨識指數(shù)無顯著影響，提示趨化因子CCL19對小鼠的認知樣行為無顯著影響。趨化因子CCL19對正常小鼠情緒樣行為的影響  

采用上述給yao方式，通過高架0型迷宮實驗和糖水消耗實驗，觀察趨化因子CCL19對小鼠焦慮及抑郁樣情緒的影響。結(jié)果表明，趨化因子CCL19顯著增加了小鼠的糖水消耗率，減少了小鼠在高架0型迷宮中開放臂的停留時間。以上實驗結(jié)果提示，趨化因子CCL19可能對小鼠的焦慮及抑郁樣行為有明顯影響。趨化因子CCL19、CCL21中和抗體對小鼠焦慮及抑郁樣行為的影響  

趨化因子CCL21是趨化因子CCL19的共受體因子，可以與CCR7結(jié)合發(fā)揮對免yi細胞的趨化作用。CCL21對焦慮及抑郁樣行為的作用亦不明確。因此，本部分實驗旨在進一步確認CCL19及CCL21對焦慮及抑郁樣行為的影響，并采用CCL19及CCL21中和抗體研究CCL19及CCL21對情緒反應的作用。  

選用2-3月齡C57BL/6小鼠，分為五組，分別為正常組(腹腔注射PBS)，CCL19組，CCL21組，CCL19中和抗體組，CCL21中和抗體組。隔天腹腔注射CCL19、CCL21(均為10|ig/kg)，注射共12次歷時35天。第30天時，分別側(cè)腦室注射CCL19、CCL21(均為0.05|ig)中和抗體及同型對照抗體（正常組及CCL19、CCL21處理組注射同型對照抗體0.05|ig)。第36天進行行為學實驗。通過高架十字迷宮以及曠場實驗評價小鼠的焦慮樣行為，通過糖水消耗實驗以及強迫游泳實驗評價小鼠的抑郁樣行為。結(jié)果表明，各處理組小鼠的自主活動性均無顯著性差異。CCL19腹腔注射顯著增加小鼠的糖水消耗率，降低小鼠在強迫游泳實驗中的不動時間，對小鼠在高架十字迷宮中的開放臂停留時間以及曠場實驗的中間區(qū)域運動時間無顯著影響。提示CCL19對小鼠抑郁樣行為有顯著影響，對小鼠焦慮樣行為無明顯影響。CCL21腹腔注射顯著增加小鼠糖水消耗率，對小鼠在強迫游泳實驗中的不動時間、曠場實驗的中間區(qū)域運動時間及高架十字迷宮的開放臂停留時間無顯著影響。提示CCL21對小鼠焦慮及抑郁樣行為均無明顯影響。  

側(cè)腦室注射趨化因子CCL19以及CCL21中和抗體后觀察小鼠的抑郁和焦慮樣行為，結(jié)果表明小鼠在上述各行為學實驗中的表現(xiàn)與同型對照抗體注射組小鼠表現(xiàn)無顯著差異，提示側(cè)腦室注射CCL19、CCL21中和抗體對CCL19及CCL21的情緒相關(guān)作用無顯著影響。  

**部分趨化因子CCL19對長期不可預期性慢性應激小鼠抑郁及焦慮樣行為的影響  

在確定CCL19對正常小鼠的抑郁樣行為有顯著影響的基礎(chǔ)上，采用長期不可預期性慢性應激（CUMS)模型，評價趨化因子CCL19對CUMS模型小鼠焦慮樣及抑郁樣行為的影響。實驗分五組，分別為正常組（腹腔注射PBS)，CUMS模型組（腹腔注射PBS)，陽**氟西汀給藥組（10mg/kg)，CCL19組（10|ig/kg)，CCL19與氟西汀合用組（10|ig/kg+10mg/kg)。隔天腹腔注射CCL19,注射共12次歷時35天。第25天至第35天，每天腹腔注射氟西汀，給藥共10次。造模持續(xù)35天，于第36天進行行為學實驗。  

釆用自主活動實驗評價趨化因子CCL19對CUMS模型小鼠的自主活動性的影響。結(jié)果表明，CUMS造模顯著降低小鼠體重，氟西汀及趨化因子CCL19腹腔注射可以在造模后期（第22天至第24天）緩解小鼠體重的下降。各處理組小鼠的自主活動性均無顯著性差異。